病理學檢查是癌癥確診和分型的主要手段之一。以淋巴瘤為代表，需要檢測患者數十種生物標記物以選擇合適的治療方案。足量、合格的組織是精準診斷的物質基礎，對于無法安全切取病變組織的患者，常用空芯針穿刺進行深部病灶活檢，然而穿刺樣本珍貴有限，難以滿足多重生物標記物檢測的需求，多色熒光技術雖能實現多重標記，但需要一定的檢測成本，亟需技術方案優化解決。

整體解決方案：多輪明場標記轉化多重熒光圖像（循環染色）

面對這些挑戰，濱松公司創新性地提出了明場循環染色整體解決方案。該方案僅需一張切片，通過循環組化染色，借助明場掃描儀（如NanoZoomer S20、S360）的高精度掃描拼接技術以及圖像配準軟件，即可實現明場多輪標記，獲得一張等價多色熒光圖像。這一技術適用于腫瘤微環境的多靶標共定位分析，為預算有限且追求高性價比的用戶提供了全新的選擇。當然，對于追求超高性能與極致品質的用戶, 濱松同時具有熒光掃描設備，可以為不同用戶的需求匹配不同的整體解決方案，本篇文章主要介紹的是明場循環染色產品方案。

在上述描述中，相信您已經捕捉到了兩個關鍵詞：一張切片循環染色以及高精度圖像拼接。這些關鍵詞背后所蘊含的先進技術，正是濱松能夠為您帶來創新性整體解決方案的核心所在。我們深知，只有經過嚴謹驗證的技術，才能真正滿足您的需求。因此，濱松不僅提出了這一創新方案，更進行了大量的實驗驗證，確保每一環節都經得起實踐的考驗。

（如果您讀到這里已經對本方案產生了濃厚興趣，您可下拉至文末，添加工程師微信。工程師將一對一為您解答上述關鍵優勢的核心機密。部分涉及專利保護的技術細節無法在文中展開哦~）

濱松實驗室驗證了石蠟切片的明場循環染色全流程操作，與傳統標準免疫組化染色不同，本方案采用了可溶于有機溶劑的顯色底物（如過氧化物酶底物AEC）替代傳統顯色劑。具體來說，實驗人員首先使用可溶于有機溶劑的顯色底物進行首次染色，確保圖像質量合格。隨后，去除蓋玻片，使用特定有機溶劑對切片進行褪色處理，顯微鏡下確認完全褪色后，在同一張切片上更換新的靶標抗體，重復染色流程，如此循環進行，直至完成所有預定標記物的檢測。最終，通過濱松NanoZoomer專用圖像處理軟件將多輪掃描圖像進行細胞核級別的精準對齊（誤差<1 μm），確保不同標記物準確共定位，最終將多張明場圖像，輸出等效于一張多色熒光的合成圖像。

• 某客戶使用濱松一體化產品方案，將癲癇病人的腦組織單張切片，順次進行兩次AEC顯色+一次DAB顯色，組化圖像疊加轉化一張三標四色的圖像，合成圖像獲得了客戶認可好評。

圖1 腦組織，明場圖像合成四色熒光圖像案例

• 濱松掃描儀保證單張切片每次掃描無位置偏移，圖像轉熒光，圖層疊加獲得三色熒光圖像。

圖2 扁桃體，明場圖像合成三色熒光圖像案例

濱松的明場循環染色產品方案在病理診斷中展現出顯著的優勢。

首先，組化結果被廣泛認為是“金標準”，不僅結果可靠，而且操作友好，易于實施。

其次，該方案能夠將組織形態學結構和空間定位信息完美結合，在一張切片上反映多個靶點的表達情況及其相互關系，極大地節約了珍貴的樣品。

明場循環染色產品方案技術要求：高精度圖像拼接偏移量小于1 μm

我們測試了不同掃描儀的細胞核疊加后的重合效果，發現了一個常見問題：部分設備在細胞核疊加時會出現偏移和組織錯位。

圖3 數字全景圖像的疊加測試

眾所周知，一張完整的數字全景圖像需要多個局部圖像拼接而成，因此圖像拼接是掃描儀的關鍵指標（圖A）。為評估該指標，濱松使用了經計量院校準的黑白線對切片來測試不同掃描儀的性能，考慮到高等動物細胞核直徑通常在3~10μm之間，當拼接偏差超過3μm時，細胞錯位會變得尤為明顯（圖B）。圖像拼接問題會導致掃描圖像出現接縫錯位或細節特征丟失等問題。結果顯示，濱松NanoZoomer掃描儀的拼接偏移量小于1μm（圖C），表現出優異的拼接精度，優于行業標準。這一精度不僅滿足了明場循環染色產品方案的標準，還確保了圖像的高質量和高精度，為病理分析提供了可靠的技術支持。

圖4 A局部圖像的拼接形成了數字全景圖像；B黑白線對圖像偏移量越大代表細胞和組織的錯位程度越嚴重；C符合產品方案的黑白線對的拼接偏移量。

接下來，讓小編為您詳細介紹濱松的整體解決方案。濱松可以為您提供全方位的支持，包括：

• 產品應用技術支持：專業的技術支持團隊，確保方案順利實施。

• 經驗證的實驗試劑：提供高質量的實驗試劑，保證實驗結果的可靠性。

• 高精度掃描設備：濱松的數字切片掃描儀，滿足高精度圖像拼接需求。

• 病理分析軟件：支持按需選配軟件相應模塊功能，滿足不同用戶的需求。

特別值得一提的是，濱松中國已經將總部核心技術引入中國，完成了S360和S20的國產化。這兩款設備均可作為國產設備出售，其掃描速度在市場上具有絕對優勢。高通量的S360，最高可容納360片，已通過FDA認證和NMPA注冊證，滿足國際國內對掃描儀的技術認證標準。面向全球市場銷售的國產S20，最高可容納20片，在海外已取得多地區注冊證，獲得了多國家的廣泛認可。

濱松深耕數字病理產品領域多年，專注于開發和生產高質量的數字病理切片掃描儀產品，本文創新性地提出明場循環染色整體解決方案，該技術特別適用于兩類關鍵場景：一是腫瘤微環境研究，通過單切片多輪精密掃描與圖像配準，在明場設備上實現了多色熒光等效分析功能；二是珍貴樣本多標檢測（如腦組織、穿刺樣本等）通過單張切片明場組化染色，替代了需多張切片才能實現檢測的方法。

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